Rotaviiruse infektsioon

Rotaviiruse infektsioon või soole / mao-gripp on nakkushaigus, millel on sümptomaatiline ravi. Rotaviiruse infektsioon on kõige sagedasem lastel.

Rotaviirusinfektsioon on lastele eriti ohtlik, kuna enamik infektsioone esineb selles konkreetses populatsioonis.

Rotaviiruse infektsiooni põhjuslik aine

Infektsiooni põhjustavad rotaviirused - Reoviridae perekonna viirused, mis on antigeense koostise poolest üksteisega sarnased.

Infektsiooni allikas

Nakkusallikas on haige. Kõige ohtlikum infektsiooni ülekandumise osas on patsient esimese 3–5 päeva jooksul pärast rotaviiruse infektsiooni kliinilisi ilminguid, kuna sel perioodil on viiruse sisaldus eritunud väljaheites kõige suurem.

Edastamise mehhanism

Viiruse ülekandumise peamine mehhanism on fekaal-suukaudne, harvem - kontakti-majapidamise paljunemisviis läbi rotaviiruse ülekandmise nakatunud objektidega. Selles suhtes on eriti ohtlikud piimatooted. Madalad temperatuurid tavaliselt viirust ei hävita, mistõttu toiduainete hoidmine külmikus ei takista rotaviiruse infektsiooni teket.

Epideemilise rotaviiruse infektsiooni periood

Haiguse puhkemine toimub sügis-talveperioodil, kuid teistel aastaaegadel võib esineda ka haiguse esinemise juhtumeid. Reeglina kaasneb rotaviiruse infektsiooni iseloomulike sümptomite levik ja esinemine gripiepideemia tekkega, seetõttu on inimesed nakatunud rotaviirusega, mida tuntakse sagedamini kui "soole grippi".

Patogenees

Pärast inimkehasse sisenemist siseneb viirus peensoole limaskestade rakkudesse, mis põhjustab soolestiku hävimise. Spetsiifiliste ensüümide süntees, samuti soole limaskesta sekretoorse funktsiooni rikkumine põhjustab tugevat kõhulahtisust ja keha dehüdratsiooni, mis on tingitud suurest hulgast elektrolüütidest ja veest, mis siseneb soole luumenisse.

Rotaviiruse infektsiooni sümptomid:

• ninakinnisus;
• kurguvalu;
• köha;
• kõhuvalu;
• iiveldus, oksendamine, kõhulahtisus;
• peavalu, palavik.

Kliinik:

Rotaviiruse infektsiooni peamised perioodid:

• inkubatsiooniperiood kestab 1-2 päeva;
• äge periood kestab 3-7 päeva;
• taastumine kestab 4-5 päeva.

Haigust iseloomustab äge algus, kuid prodromaalse perioodi olemasolu on võimalik (umbes 2 päeva). Võib põhjustada ebamugavust, üldist nõrkust, peavalu, suurenenud väsimust, söögiisu kaotust, ebameeldivaid tundeid ja kõhuvalu. Lisaks on võimalik haiguse ilmingute ilmnemine ülemiste hingamisteede osas: ninakinnisus, kurguvalu, kerge köha.

Üldine kliiniline pilt sisaldab intoksikatsiooni, gastroenteriidi ja ülemiste hingamisteede kahjustusi.

Gastroenteriidi sündroomi ilmingud on järgmised: kõva kõhunemine kõhus, valu, enamasti kõhu ääres, iiveldus, oksendamine, kõhulahtisus. Kõhulahtisus koos rotaviiruse infektsiooniga on vesine vahukas konsistents ja on kollane või rohekas kollane.

Mürgistuse sündroomi ilmingud: väsimus, nõrkus, peavalu. Rasketel juhtudel: pearinglus, minestamine.

Ülemine hingamisteede lüüasaamist iseloomustab nohu, ninakinnisus, kurguvalu, köha. Zev, kui tal on erkpunane värv.

Tüsistused ja suremus

Raskeid haigusvorme, millega kaasneb raske dehüdratsioon, iseloomustab südame-veresoonkonna puudulikkuse, isegi surma areng (2-3% juhtudest). Pärast nakatumist tekib ebastabiilne immuunsus, mis nõrgeneb aja jooksul, mistõttu on võimalik uuesti nakatumine.

Rotaviiruse nakkuse diagnoos

Rotaviiruse infektsiooni diagnoosimine on võimalik ainult siis, kui inimestel avastatakse rotaviirus laboratoorsete diagnostikameetodite abil, nagu PCR - polümeraasi ahelreaktsioon, RPHA - passiivne hemaglutinatsiooni reaktsioon, CSC - komplementi sidumine, immunofluorestsents ja paljud teised.

Täielik vereloome näitab leukotsütoosi, millel on neutrofiilne vasak nihk, suurenenud ESR - ägeda perioodi jooksul. Taastumisperioodiks on iseloomulik verepildi normaliseerumine. Uriinianalüüs näitab väikestes kogustes valkude, leukotsüütide ja punaste vereliblede, hüaliinisilindrite hulka.

Rotaviiruse infektsioon - soolestiku gripi ravi täiskasvanutel ja lastel

Ravi on sümptomaatiline, sest rotaviiruse vastu võitlemiseks puuduvad spetsiifilised antirotaviirusevastased ravimid.

Rotaviiruse infektsiooni ravi põhimõtted:

1. Rotaviirusinfektsiooniga patsiendi isoleerimine
2. Võitlus dehüdratsiooni vastu. Selleks on soovitav kasutada spetsiaalseid soolalahuseid, näiteks rehydron, soolalahus. Neid kasutatakse patsiendi ravis haiglas, kuid tavapärase happe ja baasi keha taastamiseks võib soolalahust valmistada kodus: 1 tl kuni 1 liiter vett. Soovitatav on juua palju mineraalvett.
3. Võitlus temperatuuri vastu peab algama temperatuuril 38, 5 või üle selle. Samal ajal on sõltuvalt palavikust vaja kasutada füüsikalisi meetodeid temperatuuri vähendamiseks, näiteks keha hõõrudes veega ja kemikaalidega - võttes konkreetseid ravimeid, lastel on parem küünlaid kasutada.
4. Ensüümpreparaatide, adsorbeerivate ja kokkutõmbuvate ainete (aktiivsüsi, polüsorb), piimhappebakterite valmistamine.
5. Keelatud on võtta valuvaigisteid kõhuvalu jaoks.

Näidustused rotaviirusinfektsiooni haiglasse suunamiseks:

• progresseeruv halvenemine, pikaajaline kõhulahtisus;
• uute sümptomite tekkimist.

Toitumine rotaviiruse infektsiooni korral:

Dieet sisaldab piima ja piimatoodete, sealhulgas piimatoodete vältimist. Soovitatav on lisada toidus kanaliha või riisipuder, keedetud vees ilma õli lisamata. On vaja süüa väikeste portsjonite kaupa. Soovitatav on piirata süsivesikuid sisaldava toidu tarbimist.

Rotaviiruse infektsiooni ennetamine

Peamised rotaviirusinfektsiooni ennetavad meetmed on järgmised:

• Viiruse sattumine kehasse, sealhulgas haiguse isoleerimine, korrapärane käsipesu, tõestatud ja kvaliteetsete toodete söömine, destilleeritud vee kasutamine, köögiviljade ja puuviljade pesemine;
• toitlustusettevõtete ja toodete sanitaarkontroll kauplustes, turgudel.

Enne veebisaidilt medportal.org esitatud teabe kasutamist lugege palun kasutajalepingu tingimusi.

Kasutajaleping

Sait medportal.org pakub teenuseid käesolevas dokumendis kirjeldatud tingimustel. Veebisaidi kasutamist alustades kinnitate, et olete lugenud selle kasutajalepingu tingimusi enne saidi kasutamist ja nõustute kõik käesoleva lepingu tingimused täielikult. Palun ärge kasutage veebisaiti, kui te ei nõustu nende tingimustega.

Teenuse kirjeldus

Kogu saidil avaldatud teave on ainult viide, avalikest allikatest saadud teave on viide ja ei ole reklaam. Sait medportal.org pakub teenuseid, mis võimaldavad kasutajal otsida apteekidest saadud andmeid apteekide ja medportal.org-i vahelise lepingu raames. Saidi andmete kasutamise lihtsustamiseks süstematiseeritakse toidulisandeid ja viiakse need ühte õigekirja.

Sait medportal.org pakub teenuseid, mis võimaldavad kasutajal otsida kliinikuid ja muud meditsiinilist teavet.

Lahtiütlemine

Otsingutulemustes olev teave ei ole avalik pakkumine. Saidi medportal.org haldamine ei taga kuvatavate andmete täpsust, täielikkust ja (või) asjakohasust. Veebilehe medportal.org haldamine ei vastuta kahju või kahju eest, mida teil võib olla põhjustatud juurdepääsu või saidi ligipääsu või selle saidi kasutamise või võimetuse tõttu kasutada.

Selle lepingu tingimustega nõustudes mõistate ja nõustute täielikult, et:

Teave saidil on ainult viitamiseks.

Veebilehe medportal.org haldamine ei taga vigade ja lahknevuste puudumist kohapeal deklareeritud ning kaupade tegeliku kättesaadavuse ja hindade kohta apteegis.

Kasutaja kohustub selgitama huvipakkuvat teavet apteekile telefonikõne teel või kasutama oma äranägemisel esitatud teavet.

Veebilehe medportal.org haldamine ei taga vigade ja lahknevuste puudumist kliinikute töögraafikus, nende kontaktandmetes - telefoninumbrites ja aadressides.

Ei saidi medportal.org administratsioon ega ükski teine ​​teabe edastamise protsessis osalev isik ei vastuta kahjude eest, mis võivad tekkida, kui olete täielikult tuginenud sellel veebisaidil sisalduvale teabele.

Veebilehe medportal.org haldamine kohustub ja kohustub tegema täiendavaid jõupingutusi, et minimeerida esitatud teabe lahknevusi ja vigu.

Saidi medportal.org haldamine ei garanteeri tehniliste vigade puudumist, sealhulgas seoses tarkvara kasutamisega. Saidi medportal.org haldamine kohustub võimalikult kiiresti tegema kõik võimalikud tõrked ja vead nende esinemise korral.

Kasutaja hoiatatakse, et saidi medportal.org haldamine ei vastuta väliste ressursside külastamise ja kasutamise eest, linke, mis võivad sisalduda saidil, ei anna nende sisu kinnitamiseks ega vastuta nende kättesaadavuse eest.

Veebilehe medportal.org haldamine jätab endale õiguse peatada veebisait, osaliselt või täielikult muuta selle sisu, muuta kasutajalepingut. Sellised muudatused tehakse ainult administratsiooni äranägemisel, ilma et sellest oleks kasutajale eelnevalt teatatud.

Te tunnistate, et olete lugenud käesoleva kasutajalepingu tingimusi ja nõustute täielikult kõigi käesoleva lepingu tingimustega.

Reklaamiteave, mille kohta paigutusel saidil on reklaamijaga vastav leping, on tähistatud kui "reklaam."

Rotaviiruse infektsioon

Rotaviirusinfektsioon (rotaviiruse gastroenteriit) on rotaviiruste poolt põhjustatud äge nakkushaigus, mida iseloomustab üldine mürgistus ja seedetrakti kahjustumine gastroenteriidi tekkega.

ICD-10 kood
A08.0. Rotaviiruse enteriit.

Rotaviiruse infektsiooni etioloogia (põhjused)

Ravivastane aine on perekonna Reoviridae, rotaviiruse (rotaviirus) perekonna liige. Nimi põhineb rotaviiruste morfoloogilisel sarnasusel rattaga (ladina "rota" - "ratas"). Elektronmikroskoobi all näevad viiruseosakesed välja nagu laiad rihmad, lühikesed kodarad ja selgelt määratletud õhuke serv. Rotaviiruse virion, mille läbimõõt on 65-75 nm, koosneb elektrontihedast keskusest (südamikust) ja kahest peptiidi kestast: välimisest ja sisemisest kapsiidist. 38–40 nm tuum sisaldab sisemisi valke ja geneetilist materjali, mida esindab kaheahelaline RNA. Rotaviiruste genoom inimestel ja loomadel koosneb 11 fragmendist, mis on tõenäoliselt rotaviiruste antigeense mitmekesisuse põhjus. Rotaviiruste replikatsioon inimkehas toimub ainult peensoole epiteelirakkudes.

Rotaviiruse infektsioon, vaade elektronmikroskoobis

Rotaviiruses leiti neli peamist antigeeni; peamine neist on rühma antigeen, sisemise kapsiidi valk. Võttes arvesse kõiki rühmaspetsiifilisi antigeene, jagatakse rotaviirused seitsmeks rühmaks: A, B, C, D, E, F, G. Enamik inimese ja looma rotaviiruseid kuuluvad gruppi A, mille sees eristatakse alarühmi (I ja II) ja serotüüpe. Alarühm II sisaldab kuni 70–80% patsientidest isoleeritud tüvedest. On tõendeid teatud serotüüpide võimaliku korrelatsiooni kohta kõhulahtisuse tõsidusega.

Rotaviirused on resistentsed keskkonnategurite suhtes: joogivees, avatud veekogudes ja reovetes püsivad nad kuni mitu kuud, köögiviljadel - 25–30 päeva, puuvill, vill - kuni 15–45 päeva. Rotaviirusi ei hävitata korduva külmutamisega, desinfitseerivate lahuste, eetri, kloroformi, ultraheliga, vaid surevad keetmisel, töödeldakse lahustega, mille pH on üle 10 või väiksem kui 2. Optimaalsed tingimused viirustele: temperatuur 4 ° С ja kõrge (> 90%) või madal (Autor: Nakkushaigused: riiklik juhtimine, toimetanud ND Yuschuk, Yu. Ya. Vengerov. 2009

Rotaviiruse nakkuse diagnoos

Kinnita
Juhataja asetäitja
Peamine epidemioloogiline
NSV Liidu tervishoiuministeeriumi osakond
G.G.NONISHCHENKO

7. märts 1989 N 15-6 / 6

Rotaviiruse infektsioon

(MEETODISED SOOVITUSED)

NSV Liidu Meditsiiniteaduste Akadeemia Polüomüeliidi ja Viiruse Enkefaliidi Instituut.

NSV Liidu tervishoiuministeeriumi epidemioloogia uurimisinstituut;

Epidemioloogia ja mikrobioloogia uurimisinstituut. G.N. Gabrievskogo RSFSRi tervishoiuministeerium;

Teadusliku tootmise ühing "Rostepidkompleks";

NSV Liidu Tervishoiuministeeriumi desinfitseerimis- ja steriliseerimisinstituut.

Suunised on mõeldud tervishoiuasutuste ja -asutuste praktikutele ja teadlastele.

Inimese rotaviirus kuulub loomade viiruste rühma, mis on sarnased üksteisega, mis lisaks sellele sisaldab nebraska vasika kõhulahtisusviirust (NCDV), noorte hiirte episootilist kõhulahtisusviirust, ahvviirust (SA-II), lammaste ja soolte sisust pärinevat viirust. veised (0), samuti kõhulahtisussigade, varsade, kutsikate ja teiste loomade patogeenid. Kõigil nendel viirustel on sama suurus ja kuju ning on antigeenilises mõttes üksteise lähedal.

Rotaviiruse loomad kasvavad hästi koekultuuris, seetõttu eraldati ja uuriti enne inimese rotaviirust. Vasikate ja ahvide rotaviirusi kasutati nende antigeense läheduse tõttu inimese rotaviirusele, et määrata selle etioloogiline roll ägeda gastroenteriidi korral ning seda on seni kasutatud nende seroloogilises diagnostikas ja immunoreagentide saamiseks.

Inimese rotaviiruse avastati elektronmikroskoopia abil kaksteistsõrmiksoole epiteeli rakkudes ja tüüpiliste patsientide väljaheidete ekstraktides, kus see sisaldub sageli väga olulistes kontsentratsioonides (kuni 10 osakest 1,0 g väljaheites). Rotaviiruse virion on kahe kapsiidiga (st kaetud kahekihilise valguga ümbrisega) sfäärilise osakese läbimõõduga 70-75 nm, sisaldab ribonukleiinhapet - RNA-d (11 kaheahelalist segmenti), mille tseesiumkloriidil on ujuvtihedus 1,36 g / cu. cm sedimentatsioonikoefitsiendiga 500 - 530 S

Olemasolevate omaduste kohaselt klassifitseeriti inimese rotaviirus koos eespool loetletud loomsete viirustega perekonna Reoviridae rotaviiruse perekonda. Nimetus "rotaviirus" pärineb Ladina rota - rattast, mida viiruse osake sarnaneb elektronmikroskoopilistes preparaatides.

ELISA abil avastatud antigeeni spetsiifilisuse kohaselt jagunevad rotaviirused kahte alarühma (tähistatud rooma numbriga - I ja II) ja spetsiifilisuse järgi, mis on tuvastatud neutraliseerimisreaktsioonis, 4 (ja tõenäoliselt rohkem) serotüübiga (tähistatud araabia numbritega - 1). 2, 3, 4). Teatud rotaviiruste alarühma spetsiifilisus määratakse sisemise kapsiidi peamise valguga ja nende serotüübi spetsiifilisus määratakse välise kapsiidi glükoproteiiniga. Hiljuti avastati uue tüüpi rotaviirused (nn pararotaviirused), millel ei ole rühmaspetsiifilist antigeeni.

Rotaviiruse infektsioon on laialt levinud. Teave selle identifitseerimise kohta on avaldatud Austraalias, Suurbritannias, GDRis, Kanadas, Indias, Hispaanias, USAs, Prantsusmaal, Jaapanis ja paljudes teistes riikides. Nõukogude Liidus on paljude RSFSRi, Transkaukasia, Ukraina, Balti riikide, Kesk-Aasia ja teiste piirkondade laste ja täiskasvanute hulgas registreeritud rotaviiruse gastroenteriidi haigused. Laste ja täiskasvanute hulgas võib rotaviirusinfektsioon ilmneda juhuslike juhtumite, kohalike rühmahaiguste ja massiliste puhangute vormis, mis katab mitmesuguseid elanikkonnarühmi suurtel aladel. Akuutse soolehaigusega hospitaliseeritud patsientide hulgas oli rotaviiruse gastroenteriidi korral täiskasvanute osakaal keskmiselt 10–15%, 15–27% või rohkem lapsi. Kirjanduse andmed rotaviiruse (antigeeni) eraldamise kohta tervetel lastel ja täiskasvanutel on väga vastuolulised: 0–0,5 kuni 42% lastel ja 0% kuni 7% või rohkem täiskasvanutel. Rotaviiruse infektsioon registreeritakse kogu aasta vältel. Külmhooajal tuvastatakse siiski üle 70% patsientidest. Talvel-kevadel registreeritakse ka enamus rotaviiruse infektsiooni puhanguid elanikkonna seas, samuti grupphaigused vastsündinutel ja enneaegsetel imikutel, organiseeritud rühmade lastel, eakatel. Rotaviiruse infektsioonide (nii laste kui ka täiskasvanute) jaotus sugupoolte lõikes ei olnud märkimisväärne.

Rotaviiruse etioloogia ägeda soolestiku infektsioonide nakkuse allikaks on nakatunud täiskasvanud ja lapsed - patsiendid, kellel on ilmne infektsioonivorm või väljaheidetega asümptomaatilised erituvad rotaviirused. Samal ajal nakatuvad esimese eluaasta lapsed sageli rotaviirusega nakatunud emadelt ning vanemate laste ja täiskasvanutega laste organiseeritud laste rühmadest. Inimeste nakatumine loomadelt ei ole tõestatud, kuigi see ei ole välistatud. Praegu leitakse erinevate serotüüpide rotaviirused peaaegu 50 loomaliigi ja lindude väljaheidetes, millel on väljendunud kõhulahtisuse tunnused ja ilma nendeta.

Rotaviirused patsientidel ja inimestel, kellel ei ole haiguse kliinilisi ilminguid, on praegu ainult roojaga. Patsiendid eritavad rotaviirusi keskkonda alates esimesest haiguse päevast, samal ajal kui kõigil patsientidel tuvastati haiguse esimese viie päeva jooksul maksimaalne patogeeni sisaldus väljaheites (kuni 10–10 viirusosakest 1 g kohta), mis määrab patsientide suurima epidemioloogilise riski teistele. see haigusperiood. Järgmise 6 kuni 10 päeva jooksul langeb rotaviiruste vabanemine patsientide väljaheidetega järsult, kui väljaheide normaliseerub. Rotaviiruste eritumise keskmine kestus patsientidel on 7–8 päeva, kuid mõnedel patsientidel võib see periood kesta kuni 20–30 päeva. Isikud, kellel ei ole haiguse kliinilisi ilminguid, võivad anda väljaheidetega rotaviiruste pikaajalist vabanemist - kuni mitu kuud või rohkem (vaatlusperiood).

Rotaviiruste peamine ülekandemehhanism on fekaal-suukaudne, mis toimub vee-, toidu- ja kodumaiste ülekandeteede kaudu. Sporaadiliste ja kohalike rühmahaiguste korral esineb rotaviiruste infektsioon peamiselt leibkonna vahenditega. See soodustab rotaviiruste väga madalat patogeenset annust (10 viirusosakese sees). On tõestatud, et mitmesugustes keskkonnapiirkondades säilitavad rotaviirused elujõulisuse 10–15 päevast (sõltuvalt temperatuurist ja niiskusest) ühe kuu jooksul; väljaheites mitu nädalat kuni seitse kuud.

Praegu registreeritakse meie riigis ja välismaal vee ja toidu rotaviiruse infektsiooni puhanguid. Rotaviirused on leitud jõgede, järvede, merede, põhjavee, kraanivee, teatavate toiduainete (piim jne) vees.

Võimalik, et mõnedel juhtudel võib tilguti, tolm ja muud rotaviiruse teed rakendada.

Rotaviirused on tuntud ka kui üheks peamiseks etioloogiliseks agensiks akuutse gastroenteriidi haigestumiste puhul. Erinevate profiilidega haiglates võib nakatuda kuni 50-60% haigetest lastest. On juhtumeid haiguspuhangute korral rasedus- ja sünnituskodudes. Sageli mõjutavad lapsed, kellel on kunstlik söötmine, kellel on ägedad ja kroonilised haigused, erinevat tüüpi immuunpuudulikkusega.

Tundlikkuse immuunsus. Kõigi vanuserühmade inimesed on rotaviirusele vastuvõtlikud. Suurimat tundlikkust on täheldatud 6 kuu vanustel lastel. kuni 2 aastat. Rotaviiruste vastased antikehad avastatakse 50–60% -l esimesel eluaastal, vanuses üle 3 aasta - rohkem kui 90% -l ja peaaegu kõigil täiskasvanutel. Kirjanduse kohaselt näitab antikehade olemasolu seerumis põhimõtteliselt ainult inimkeha kohtumist rotaviirusega, mitte immuunsuse olemasolu, kuna isegi märkimisväärse hulga humoraalsete antikehade korral on korduvad haigused võimalikud. Immuunsus rotaviiruse infektsiooniga ei ole täielikult teada. Arvatakse, et resistentsus nakkuse vastu on tingitud peensoole epiteeli rakkude kohalikust immuunsusest, mis on seotud IgA klassi sekretoorsete antikehade esinemisega. Neid antikehi leidub ka imetava emapiimas ja ilmselt toimivad vastsündinute passiivse immuniseerimise tegurina, mis võib haiguse kliiniliste ilmingute puudumisel väljaheitega eraldada keskkonda märkimisväärses koguses rotaviiruseid ja nakatada enneaegseid lapsi ja ebasoodsa taustaga lapsi. Erinevate serotüüpide rotaviirused ei tekita rist-immuunsust ning seetõttu võib sama laps või täiskasvanud olla viiruse teiste serotüüpide tõttu korduvad haigused. Samuti on täheldatud immuunsuse ebastabiilsust rotaviiruse gastroenteriidi korral, korduvaid haigusi registreeritakse sageli 1–1,5 aastat pärast nakatumist.

Rotaviiruse infektsiooni epideemia protsessi tunnused:

- territoriaalse jaotuse kõikjal;

- raske talvine või talvine-kevadine sesoonsus;

- patogeeni väike nakkuslik doos ja kõrged fokused organiseeritud rühmades;

- kahju kõikidele vanuserühmadele;

- suur osa juhtudest alla 2-aastaste laste seas, kellel on maksimaalne haiguste avastamine laste teisel poolel;

- vee ja kodumaiste ülekandemarsruutide kõrge aktiivsus;

- kodukohtide asukoht, mis piirdub peamiselt perekonnaga;

- rotaviiruste asümptomaatilise isoleerimise võimalus laste ja täiskasvanute hulgas;

- haiglaravi ja haigete laste vanemate osalemise võimalus.

Rotaviiruse infektsiooni kliiniline pilt on palju sarnane erineva etioloogiaga ägeda soolestiku haiguste kliiniliste ilmingutega, mis raskendab selle haiguse diagnoosimist. Siiski on mitmeid iseloomulikke erinevusi, mis võimaldavad selle haiguse õigeaegset kahtlustamist ja epideemia- ja terapeutiliste meetmete õiget teostamist.

Inkubatsiooniperiood on lühike ja kestab 15 tundi kuni 3 - 5 päeva, kuid kõige sagedamini - 1-3 päeva.

Enamikul patsientidel on haiguse äge algus, kui kogu sümptomite kompleks areneb haiguse esimestel päevadel. Väikestel lastel on võimalik subakuutne algus, mida iseloomustab haiguse ilmnemine esimestel päevadel 1 või 2 sümptomit ja ülejäänud ülejäänud 2 kuni 3 päeva pikkune haigus. Rotaviirusinfektsiooni kõige patogeomoonilisemaks on seedetrakti kahjustus, mis 60–70% patsientidest on kombineeritud hingamisteede kahjustuste sümptomite tekkega. Mõnikord võivad katarraalsed sümptomid esineda 3–4 päeva jooksul soolestiku talitlushäirest. Respiratoorset sündroomi iseloomustab neelu, pehme suulae ja palatiinikaarte mõõdukas hüpereemia ja granulaarsus, ninakinnisus, köha, mis erinevalt ARVI-st on vähem väljendunud, neil puudub kalduvus suureneda ja on lühiajaline (4–5 päeva). Kõhulahtisus esineb 95–97% patsientidest. Rotaviiruse infektsiooni korral iseloomustab gastroenteriidi, vähem enteriidi teket. Tool on tavaliselt vedelik, vesine, vahutav, halvasti värvitud, lisanditeta või väikese koguse lima. Väikestel lastel valitseb vesine kõhulahtisus, mis seletab ekssikoosi sagedasemat arengut selles vanuserühmas. Keskmine väljaheide ei ületa 4-5 korda päevas, kuid noorematel lastel võib see ulatuda 15 kuni 20 korda. Kõhulahtisuse kestus täiskasvanutel ja vanematel lastel on 3–7 päeva, imikutel kestab sageli kuni 10–14 päeva. Oksendamine on südame sümptom ja seda täheldatakse 80% rotaviiruse infektsiooniga patsientidest. Kõige sagedamini esineb see samaaegselt kõhulahtisusega või enne seda. Oksendamine on sageli korduv, kuid lühiajaline (1–2 päeva). Selle nakkuse korduv ja kontrollimatu oksendamine ei ole tüüpiline ja sageli viitab see segatud infektsioonile. Temperatuur ei ületa reeglina 38,5 - 39 ° C ja normaliseerub 3-4 päeva jooksul. Kõige tavalisemad mürgistuse tunnused on nõrkus, letargia, nõrkus, peavalu, pearinglus. Haiguse tõsidust määrab isotoonilise ekssikoosi, I-II astme, vähem sageli III astme, mis on sagedamini imikutel, areng. Samal ajal on elektrolüütide kadu (Na ja K) väikesed, mida tuleb rehüdratatsiooniravi läbiviimisel arvesse võtta.

4. Diagnoos ja diferentsiaaldiagnoos

Objektiivne uuring patsientidel, kellel täheldati letargiat, konjunktiivi hüpereemiat ja vaskulaarset süstimist. Keel mõõdukalt kaetud, kuiv. Peensoole piirkonnas on palpatsioonil kõht pehme, mõõdukalt valulik. Maks ja põrn ei laiene. Pime ja sigmoid käärsoole pehme, valutu. Vererõhk on vähenenud. Pulss ei ole ülekoormatud, vaid pigem on kalduvus suhtelisele bradükardiale. Meningeaalseid nähtusi ei ole. Perifeerses veres võib haiguse alguses esineda mõõdukas leukotsütoos, 2 kuni 3 päeva jooksul haigusest esineb kalduvus leukopeenia tekkeks koos leukotsüütide stabide arvu vähenemisega ning lümfotsüütide ja monotsüütide arvu suurenemisega, ESR ei kiirene.

Uriini laboratoorses analüüsis esineb kerge albuminuuria, kiiresti mööduv mikrohematuuria, leukotsüütide arvu väike suurenemine ja hüaliinisilindrite ilmumine. Muutused uriinis on kooskõlas haiguse tõsidusega ja dehüdratsiooniga.

Väljaheite mikroskoopiline uurimine leukotsüütide arv ei ole vaateväljas suurem kui 10-15, limaskestade segu.

Rektoromanoskoopiliselt on võimalik tuvastada pärasoole ja sigmoidi käärsoole limaskestade mõõdukas hüpereemia ilma fookuse muutusteta.

Rotaviiruse gastroenteriit jaguneb raskusastme järgi, mis sõltub kõhulahtisuse intensiivsusest ja selle põhjustatud dehüdratsioonist ning üldise mürgistuse raskusest. Rotaviiruse gastroenteriidi raskusaste on kolm: kerge, mõõdukalt raske ja harvem raske.

Diferentsiaaldiagnoos viiakse läbi salmonelloosi, koolera, düsenteeria, toidust põhjustatud toksikofektsioonide poolt, mis on tingitud tinglikult patogeensetest mikroorganismidest, persinioosist ja muust viirusliku gastroenteriidi poolt.

Salmonelloosi gastrointestinaalset vormi iseloomustab halva kvaliteediga tooteid söönud inimeste samaaegne haigus. Tavaliselt on akuutne algus: hüpertermia, tugevad külmavärinad, oksendamine, tugev kõhuvalu, rohke väljaheide, mis säilitab oma väljaheite, neutrofiilne leukotsütoos koos leukotsüütivalemi nihkumisega vasakule. Kui salmonelloos ei ole neelu limaskestas muutunud, suureneb maks tavaliselt. Patogeeni isoleerimine väljaheite bakterioloogilises uuringus, oksendamisel või maoloputusel lahendab diagnoosi.

Paljude haiguse massi ja kiiruse kliiniliste tunnuste kohaselt võib rotaviiruse gastroenteriit sarnaneda koleraga. Kuid rotaviiruse infektsiooni iseloomustab kergem kursus ja eelkõige asjaolu, et see ei arenda algiidi seisundit, samuti orofarünni limaskesta tüüpiliste muutuste esinemist.

Kõige olulisemad on bakterioloogiliste uuringute tulemused Vibrio cholerae avastamise korral. Sarnane olukord tekib ka NAG-infektsiooni korral.

Bakteriaalset dententeeriat iseloomustab äge kõhuvalu, sagedane, mõnikord vale, tungimine, lima ja verega segatud väljaheide, märgistatud sigmoidiit, pidev palavikureaktsioon, patoloogilised muutused käärsoole distaalses osas vastavalt rektoskoopiale. Kõik need märgid, samuti bakterioloogiliste uuringute tulemused, muudavad düsenteeria koliidi vormi diferentsiaaldiagnostika suhteliselt lihtsaks. Düsenteeria gastroenterilise vormi korral suureneb bakterioloogiliste uuringute tulemused dramaatiliselt.

Oportunistlike patogeenide poolt põhjustatud rotaviiruse gastroenteriidi ja toidust põhjustatud toksikoloogiliste haiguste diferentsiaalne diagnostika on eriti raske, arvestades nende haiguste kliinilise pildi ebapiisavat tundmist. Vastavalt laboriuuringute diagnostilisele tähtsusele tuleks eelistada viroloogiliste ja immunoloogiliste uuringute positiivseid tulemusi, mis kinnitavad haiguse rotaviiruse iseloomu, mitte tingimata patogeensete bakterite avastamist patsiendi väljaheites.

Perinioosi gastrointestinaalse vormi puhul on iseloomulik rohkem astmeline algus, lihas- ja liigesvalude esinemine koos gastroenteriidiga; maksa suureneb tavaliselt; väljaheide on viskoosne, kuna lima on oluliselt segunenud ja mõnikord on võimalik veri. Leukotsütoosi täheldatakse veres; ESR kasvas.

Gastroenteriidi sündroom võib mõnedel viirushaigustel olla silmapaistev. Nende hulka kuuluvad adenoviirusinfektsioon, mis lisaks soole kahjustustele on iseloomulik konjunktiviit, riniit, farüngiit, tonsilliit, bronhiit, kopsupõletik, emakakaela lümfisõlmede suurenemine, maks, põrn, pikaajaline palavik.

Koksaki ja ECHO enteroviiruste poolt põhjustatud enteriidi ja gastroenteriidi korral iseloomustab rotaviiruse gastroenteriiti monosündroomne kliiniline pilt, kus soole kahjustus on juhtiv koht. Seevastu enteroviiruse epideemiliste puhangute ajal täheldatakse haiguse erinevate kliiniliste vormide olemasolu, kliinilise pildi "mitmekesisust", milles aju, naha ja ülemiste hingamisteede kahjustuste sümptomid võivad mängida olulist rolli.

Lastel on kolibatsilloosiga rotaviirusinfektsiooni diferentsiaalne diagnoos kõige raskem ja see võib põhineda järgmistel kriteeriumidel:

- suurema rotaviiruse infektsiooni ägenemine võrreldes kolibatsilloosiga, mis on tingitud eriti enteropatogeensest kolibatsilloosist;

- kiirem taastumine rotaviiruse infektsioonist isegi väikelastel;

- respiratoorsete sündroomide esinemissageduse suurenemine rotaviiruse infektsiooni korral, kuid selle väiksem raskusaste ja kestus.

Suurim raskus on segatud rotaviirus-bakteriaalsete nakkuste diagnoos, mille osakaal aasta talveperioodil on üsna suur (7–10% kõigist OKI-st).

Segainfektsioonide kliiniku tunnuseks on mõlemale kombineeritud infektsioonile iseloomulikud sümptomikompleksid: joobeseisundi sümptomite suurenemine, põletikuliste muutuste ilmingud väikese ja jämesoole limaskestas ning aeglasem taastumine.

Rotaviiruste poolt põhjustatud OCI kahtlustatavate laste ja täiskasvanute haiglaravi viiakse läbi vastavalt kliinilistele (haiguse raskusastmetele) ja epidemioloogilistele näidustustele (nõrkade laste olemasolu patsiendi keskkonnas, esimese eluaasta lapsed, koolieelsete lasteasutuste külastamine, toiduainetööstuse töötajad ja neile võrdsustatud isikud) võimetus järgida epideemiavastast režiimi kodus jne). Alla ühe aasta vanused lapsed, kellel on tõsised OCI sümptomid, on haiglaravil. Eraldi haigestunud rotaviirusliku gastroenteriidi ja erineva etioloogiaga ägeda soolestiku infektsiooniga patsientide haiglaravi on kohustuslik. Tuleb järgida kambrite (kastide) ühekordse täitmise põhimõtet.

Rotaviiruse gastroenteriidi põdevate patsientide ravi, võttes arvesse olemasolevaid ideid selle haiguse patogeneesi kohta, sisaldab säästvat raviskeemi ja kompenseerimist soole funktsionaalse seisundi rikkumiste eest, hüdroelektrolüütide tasakaalu taastamist ja keha detoksikatsiooni.

Haiguse ägeda perioodi ajal on ette nähtud 4-B dieet, kus on süsivesikute (kuni 200 g) järsk piiramine ja valgu koguse suurenemine (kuni 150 g), vähene kalorisisalduse vähenemine (2400 cal). Suhkru kogus on piiratud 40 g päevas, köögiviljad ja puuviljad. Piim on välistatud. Sool ei ole piiratud.

Näidatud on selliste kodumaiste seedetrakti multiensüümpreparaatide nagu oras, solizim, somilase, mis rotaviiruse gastroenteriidi põdevate patsientide ravis ei ole halvem (panzinorm, seedetrakt, pidulik, triensüüm jne).

Hinnatakse organismi dehüdratsiooni määra ja viiakse läbi ravi, mille eesmärk on vee ja soolade liigsete kadude taastamine. Kui dehüdratsioon on I-II kraadi järgi V.I. Glükoosi-elektrolüüdi lahuseid manustatakse suukaudselt Pokrovsky'le (rehüdronglükosolaan), võttes arvesse vedelike ja elektrolüütide kadu, ning III astme dehüdratsiooni korral on vaja alustada ravi veesoola lahuste (trisool, kvartosool, chlosol, acesol) intravenoosse manustamise teel.

Lahenduste juurutamise taktika viiakse läbi vastavalt rehüdratatsiooniteraapia põhimõtetele.

Normaalse vereringe ja detoksikatsiooni stabiliseerimiseks saate sisestada kolloidseid lahuseid (gemodez, polyglukin, reopolyglukine).

Tuleb rõhutada, et antibakteriaalsete ravimite väljakirjutamine, kui samaaegne bakteriaalne infektsioon puudub, ei ole õigustatud.

Soovitatav on kasutada adsorbeerivaid ja kokkutõmbuvaid ravimeid.

Viirusinfektsiooni ravi ei ole praegu välja töötatud.

Taastusravi ekstrakt viiakse läbi pärast väljaheite stabiilset (2-3 päeva) normaliseerumist ja kõigi teiste haiguse kliiniliste sümptomite kadumist komplikatsioonide puudumisel.

Enne kliiniliste sümptomite kadumist antakse lastele, kes käivad koolieelsetes lasteasutustes, toidutööstuse töötajates ja neile võrdsetes isikutes ühekordse viroloogilise uuringuga.

Ülejäänud patsientide kontingendid ei kuulu kohustusliku laboriuuringu alla.

6. Laboratoorsed diagnoosid

Rotaviiruse gastroenteriidi laboratoorset diagnoosi ei ole praegu raske. Kliinilise sündroomi ja lühiajalise haiglaravi kiire areng tingib vajaduse kasutada kiiret meetodit haiguse etioloogia määramiseks. Enamik käesolevas juhendis soovitatud laboratoorsetest diagnostikameetoditest võimaldab teil avastada esimese päeva jooksul rotaviirusi. Meetodi valiku määrab igal juhul laboratooriumi tehniline varustus ning sobivate reaktiivide kättesaadavus.

Haiguse retrospektiivses analüüsis on olulised traditsioonilised meetodid seroloogiliste muutuste tuvastamiseks patsientide seerumis (neutraliseerimisreaktsioon, hemaglutinatsiooni inhibeerimine ja komplemendi sidumine). Seetõttu on rotaviirusinfektsiooni varase seroloogilise diagnoosimise jaoks soovitatav määrata IgM-klassi antikehad.

Haige inimese viroloogilise uuringu eesmärk on tavaliselt väljaheited. Rotaviiruste esinemist ja levikut keskkonnas tuvastatakse, uurides mulla, toidu ja vee proove (reovesi, looduslike ja kunstlike reservuaaride vesi, joogivesi).

6.1. Rotaviiruste tuvastamine kliinilises materjalis

ja keskkonnaproovides

6.1.1. Proovi ettevalmistamine katsetamiseks; proovide võtmine

Viroloogiliste uuringute jaoks proovide võtmisel on täidetud mõned üldnõuded, võttes meetmeid materjali kaitsmiseks saastumise eest. Proovid võetakse ainult steriilsetes anumates tihe kummikorgiga, tugevdatud liimkipsiga. Proovide transportimine konteinerites jää või külmutusagensiga.

6.1.2. Vedrustuse ettevalmistamine, selgitus,

proovi puhastamine, bakteriaalse taimestiku eemaldamine

Väljaheidete proovide valmistamine rotaviiruse uuringus hõlmab 10% suspensiooni valmistamist, homogeniseerimist, tsentrifuugimist kiirusel 3000 p / min. bakteriaalse taimestiku eemaldamiseks 30 minuti jooksul. Keskkonna ja toiduainete objektide uurimisel viiakse läbi uuritud materjali eelkontsentratsioon.

6.1.3. Viiruse osakeste kontsentratsioon veeproovides

Rotaviiruste kontsentratsioon on oluline tingimus nende avastamise tõhususe suurendamiseks veekeskkonnas.

Rotaviiruste kontsentreerimise meetod, kasutades adsorptsioonikromatograafiat poorsel ränidioksiidil - makropoorne klaas (MPS) - on lihtne ja mugav, kasutades vee koguseid 0,1 kuni 10 liitrit. Kui proov viiakse läbi MPS-i kihi, sorbeeritakse viirus klaasi pinnale. Viiruse elueerimiseks, kasutades lahuseid, mis on võimelised viiruse desorptsiooni tekitama. Viirus eemaldatakse klaasist väikese koguse lahusega, mis põhjustab kümnete kuni sadade korduste kontsentratsiooni võrreldes algse prooviga.

Selleks, et parandada adsorptsiooniomadusi, töödeldakse MPS-1000 VGH brändi klaasist kodumaised valmistised järgmiselt: valmistatakse 3% HO ja 6 M HCl segu (1: 1). Klaas täidetakse valmis seguga kiirusega 1 mahuosa klaasi 2 mahuosa segu kohta. Keetke suitsukapis (ilma korgita) 1 tund, järgides ohutusnõudeid. Pesta neutraalse pH-ga destilleeritud veega. Kuivatage 100 ° C juures.

Klaasist kolonn (eelnevalt silikoonvedelikuga töödeldud), täidetud klaasiga (2–3 cm3), leotatud destilleeritud vees. Katseproovile (3 l) lisatakse 1 M MgCl lahus lõppkontsentratsioonile 0,05 M. Vesi juhitakse läbi kolonni kiirusega 150-500 ml / tunnis, reguleerides voolukiirust klambritega. Läbi kolonni 10 ml elueerimislahust: lihaekstrakt 3%, pH 9,0; või trüptoosfosfaadi puljong 1%, pH 9,0; või Tris HCI 0,1 M, mis sisaldab 2 M NaCl, pH 11,0 (lahused on loetletud nende elueerivate omaduste vähendamise järjekorras). Sorbeerige fraktsioonid mahuga 1 ml, pH fraktsioonides viiakse neutraalsetele väärtustele.

6.2. Viirusosakeste tuvastamine, kasutades elektronmikroskoopiat (EM) ja immunoelektronmikroskoopiat (IEM)

Kuna rotaviiruse osakeste sisaldus tüüpiliste patsientide väljaheidetes on esimese 2–3 päeva jooksul tavaliselt kõrge, kasutatakse EM-meetodit laialdaselt rotaviiruse tuvastamiseks, mida saab kasutada rotaviiruse osakeste avastamiseks ilma fekaalide suspensiooni lisakontsentratsioonita.

Ravimite valmistamiseks kantakse uuritud 10% suspensiooni tilk hambavaha või vahatatud paberi plaadile. Kile-substraadi tilk langetab subjekti elektrone mikroskoopilise võrgu. 1–3 minuti pärast võrku pestakse tilk destilleeritud veega ja kontrastaine lahusega (2% fosforotiinhappe lahus, mille pH on reguleeritud 6,5–6,6 1 NKOH-ga), mille ülejääk 30–40 sekundi pärast. eemaldage filterpaber ja võrk kuivatatakse. Preparaatide vaatamine toimub elektronmikroskoobis, mille instrumentaalne suurendus on 30-50000x.

Rotaviirused on üsna kergesti tuvastatavad fekaalide suspensioonide EM-uurimise teel viirusosakeste iseloomulikus suuruses ja morfoloogias. Rotaviirused tuleks eristada erinevatest viirusosakestest ja viirusetaolistest vormidest, bakteriofaagi osakestest ja väljaheites leiduvast bakteri lipukestest.

IEM-tehnoloogia kasutamine võimaldab mõnel juhul mitte ainult suurendada rotaviiruste avastamise protsenti, vaid ka tõestada nende etioloogilist rolli. IEM uuringu puhul segatakse 0,1 ml 1: 5 lahjendatud loomade immuunseerumit 0,4 ml 10% väljaheitega. Segu inkubeeritakse 1 tund toatemperatuuril ja seejärel 12 tundi 4 ° C juures, seejärel tsentrifuugitakse 90 minutit. kiirusel 15 000 p / min Supernatant nõrutatakse ja saadud sade resuspendeeritakse mõne tilga destilleeritud vees, mis on kontrastitud 2% fosforotunghappe lahusega (pH 6,5) ja asetatud objektivõrkudele; liigne niiskus eemaldatakse filterpaberiga. Ravimite uurimine viiakse läbi elektronmikroskoobis, mille instrumentaalne suurendus on 50000x, vaadates vähemalt viit subjekti ruudustikku. Positiivse tulemuse korral avastatakse preparaatides rotaviiruse osakesi (immuunkompleksid).

6.3. Rotaviiruse antigeeni tuvastamine katsematerjalis

6.3.1. Immunoreagentide saamine

Hüperimmuunseerumid ja spetsiifilised rotaviiruse immunoglobuliinid saadakse küülikute, merisigade, kanade immuniseerimisel.

Antigeen immuniseerimiseks valmistati järgmiselt: 5 ml rotaviiruse SA-II kultiveerimissuspensiooni töödeldi trüpsiiniga, lisati 1,5-liitristele madratsipudelitele rohelise ahvi neeru 4647 heteroploidsete rakkude monokihiga, inkubeeriti 60 minutit 37 ° C juures; lisage seerumivaba hoolduskeskkond ja inkubeerige 24 kuni 48 tundi temperatuuril 37 ° C. Kogu biomassi külmutatakse või töödeldakse ultraheliga kolm korda, lisatakse PEG M 6000 kuni 8 - 10% kontsentratsioon, jäetakse 20 tunniks 4 ° C juures, seejärel tsentrifuugitakse kiirusel 10 000 p / min. 2 tundi Sade suspendeeritakse uuesti PBS-is (1/30 - 1/50 biomassi mahust). Pärast freoni 113 puhastamist kasutatakse vesifaasi loomade immuniseerimiseks ja antigeenina immunoloogilistes uuringutes. Kontsentraat 1 ml mahus sisaldab vähemalt 10 viirusosakest.

Küülikute immuniseerimine: küülikuid süstitakse intravenoosselt 2 ml rotaviiruse preparaadiga päevadel 1, 7, 35, 42 ja verd võetakse päeval 49 pärast immuniseerimise algust. Päevadel 1 ja 35 süstitakse antigeeni täiendava Freundi täieliku adjuvandiga mitmes tagaküljel.

Immunoglobuliini fraktsioon sadestatakse hüperimmuunse küüliku seerumist 10% -lise polüetüleenglükooli vesilahusega (PEG) molekulmassiga 6000. Sade kogutakse tsentrifuugimisega, lahustatakse ja dialüüsitakse 0,01 M K-fosfaatpuhvri (pH-7,4) suhtes 0:01 M Nace-ga ( FSB). Immunoglobuliinide kontsentratsioon määrati spektrofotomeetriliselt.

Merisigade immuniseerimine: loomi süstitakse intramuskulaarselt 0,5 ml kontsentreeritud rotaviiruse preparaadiga, milles on võrdne kogus Freundi täielikku adjuvanti 1.14 ja 28. päeval, vereproovid kaks nädalat pärast viimast immuniseerimist.

Kanade immuniseerimine: Valge Leghorni Zarya-17 tõu hübriidide munakanade 20-nädalased kanad immuniseeritakse intravenoosselt 1, 14, 28 päeva jooksul. Esimese immuniseerimise ajal manustatakse antigeeni täiendavalt intramuskulaarselt segus, milles on võrdne kogus Freundi täielikku adjuvanti. Pärast kolmandat immuniseerimist täheldatakse munakollase antikeha maksimaalset kogust. Kanu võib pärast immuniseerimist püsivalt kasutada.

Kanade immunoglobuliinide isoleerimine: munakollane eraldatakse valgust koorega või Büchneri lehtris ja pestakse kraaniveega. Kollane (10 ml) viiakse tsentrifuugiküvetti, lisatakse kaks korda (20 ml) FSB-d ja segatakse hoolikalt. PEG 6000 kantakse kontsentratsioonile 3,5% (mass / maht) ja segatakse 10 minutit. 14000 g juures. Supernatant filtreeritakse läbi filterpaberi gradueeritud silindrisse. Lisage täiendav PEG 6000 lõppkontsentratsioonini 12% ja segage. Sadestunud immunoglobuliinid kogutakse tsentrifuugimisega (10 min. 14 000). Sade lahustatakse 5 ml FSB-s (1/2 ruumala munakollast). Valgu kontsentratsioon preparaadis on tavaliselt 6 - 12 mg / ml.

6.3.2. Ensüüm-immunoanalüüsi meetod (ELISA)

Ensüümimolekuliga (peroksidaas) märgistatud antikehade kasutamisel põhinev immuunanalüüsi meetod (ELISA) on üks levinumaid ja tõhusamaid ja spetsiifilisi meetodeid viiruse antigeeni tuvastamiseks. Tavaliselt kasutage otseseid ja kaudseid "võileiva" võimalusi. Ensüümimarker tuvastati värvusreaktsioonis substraadiga. Otsene ELISA variant on kiirem kui kaudne, kuid see on vähem tundlik ja spetsiifiline. Kaudse variandi koostises kasutatakse immunoglobuliinide anti-spetsiifilist kaubanduslikku konjugaati ensüümiga; Konjugaadi ja paneelile sorbeeritud antikehade vahelise mittespetsiifilise interaktsiooni vältimiseks on vaja kahe erineva loomaliigi viirusevastast seerumit.

Kaudsed ELISA variandid: süvenditesse sisestati 0,1 ml immunoglobuliini immunoglobuliine immuniseeritud kanade munade kollasest poolest (48) süvenditest. Teises pooles viiakse enne immuniseerimist munadest pärinevad immunoglobuliinid negatiivse kontrollina. Immunoglobuliinide sorptsioon viiakse läbi lahuses, mille kontsentratsioon on 5 μg / ml PBSis üleöö temperatuuril 4 ° C. Kaevude sisu tühjendatakse, süvendid pestakse PBS-T-ga ja 0,1 ml testitavat proovi kantakse PBS-T-s koos 1% BSA ja 0,01 M EDTA-ga rakkudele antirotaviiruse ja normaalsete immunoglobuliinidega ning inkubeeritakse 1 tund 37 ° C juures.

Pärast pesemist lisatakse PBS-T puhvrisse süvenditesse 0,1 ml 1: 1000-1: 25000 lahjendatud küüliku anti-rotaviiruse seerumit. Seerumi optimaalne lahjendus määratakse kindlaks eelnevalt määratud katsetes. Paneelid suletakse ja inkubeeritakse 2 tundi 37 ° C juures. Süvendid pestakse ja lisatakse 0,1 ml peroksidaasiga märgistatud antikehade küüliku IgG vastu kontsentratsiooni 1 kuni 2,5 μg / ml peroksidaasi sisalduse kohta PBSB-T-BSA-s ja inkubeeritakse 1 tund 37 ° C juures. Süvendid pestakse, lisatakse 0,1 ml värskelt valmistatud substraadi segu (O-fenüleen-diamiin 0,5 mg / ml 0,05 M Na-tsitraatpuhvris pH 5,0; HO - 0,03%. (Tähelepanu! olge ettevaatlik!)) ja inkubeerige toatemperatuuril pimedas 30-40 minutit. Ensümaatiline reaktsioon peatatakse 0,05 ml 3 M HSO lisamisega. Reaktsiooni tulemused arvestavad visuaalselt või spektrofotomeetriliselt. Proove loetakse positiivseteks, mille optiline tihedus ei ole väiksem kui 2 korda negatiivse kontrolli optiline tihedus.

6.3.3. Koaglutinatsiooni meetod

See meetod põhineb Cowani tüve A-valgu Staphylococcus aureus võimel ühendada IgG Fc-fragmendiga ning spetsiifilise antigeen-antikeha kompleksi moodustumise ajal põhjustab aglutinatsiooni fenomeni.

Koaglutinatsioonireaktsiooni valmistamiseks kasutatakse kaubanduslikku kuiva stafülokoki reaktiivi, mis sisaldab valku A (Pasteuri elektrokeemilise meditsiini teadusinstituut, Leningrad), mis rehüdreeritakse enne kasutamist 0,1% metüleensinise lahusega.

Varem testiti iga hüperimmuunseerumi seeriat antistafülokokk-antikehade olemasolu suhtes. Selleks segatakse klaasplaadil võrdsed kogused seerumit lahjendusega 1: 500 ja 10% stafülokoki suspensiooniga. Arvestage tulemusi 5 minuti jooksul pärast hariduse agglutinati. Valitud seerumi töö jaoks, mis ei sisalda antistafülokokk-vastaseid antikehi lahjendusega 1: 500. Diagnostika valmistamiseks segatakse 0,01 ml FSB-ga 1:10 lahjendatud ratavirusevastast seerumit 0,5 ml 10% stafülokokki suspensiooniga, mida hoitakse toatemperatuuril 1 tund, seejärel lisatakse 9,5 ml FSB (diagnosticum). Samamoodi on stafülokokk sensibiliseeritud eelimmuunseerumiga (kontrollreagent). Diagnostika ja kontrollreagenti kasutatakse PKA ja TRKA reaktsioonis.

RCA paigutamiseks paneeli u-kujuliste süvenditesse valmistage 0,05 ml PBS-i pH-7,4; kahes süvendis tehakse Takacchi mikrotiiter või jaotur 0,05 ml 10% väljaheidete suspensiooni ja valmistage seeriaviisilised lahjendused 1: 2 - 1: 256. Esimese rea süvenditesse lisatakse 0,05 ml diagnostikat ja teise rea süvenditesse 0,05 ml kontrollreagenti. Paneelid kaetakse kaanega ja inkubeeritakse termostaadis temperatuuril 37 ° C - 3 tundi. Igas katses kasutati rotaviiruse suhtes positiivse ja negatiivse väljaheite suspensiooni proovi, samuti rotaviirusega SA-II nakatunud rakkude lüsaate, mida testiti varem elektronmikroskoopia abil.

Reaktsiooni kaalumine: tulemusi peetakse positiivseks, kui koos diagnostikaga tuvastatakse aglutinatsiooni “vihmavari”, kusjuures kontrollreagendiga on paralleelselt negatiivne tulemus või tiitri neljakordne vähenemine. Tulemused loetakse negatiivseteks, kui kettad moodustavad mõlemad paralleelsed read. Mittespetsiifilise koaglutinatsiooni kõrvaldamiseks seotud ridades adsorbeeritakse fekaalide suspensioon võrdse koguse normaalse küüliku seerumiga 37 ° C juures 2 tundi, millele järgneb kuumutamine 80 ° C juures 45 minutit. Seejärel kogege uuesti koaglutinatsiooni reaktsioonis.

6.3.4. Koaglutinatsiooni tahke faasi reaktsiooni meetod (TRKA)

See meetod rotaviiruse antigeenide tuvastamiseks põhineb tahkefaasilise immunoanalüüsi meetodi põhimõtetel (vt 4.3.2). Erinevalt viimasest ei kasuta TRCA ensüümi märgisena, vaid diagnostika ja kontrollreagendina (vt 4.3.3).

TRKA-st lavastamiseks kasutage u-kujuliste aukudega immunoloogilisi paneele. Sensibiliseerimiseks lisatakse süvenditesse 0,1 ml 0,01 M karbonaat-bikarbonaadi puhvriga lahjendatud hüperimmuunseerumit (pH 9,6). Seerumipaneelid jäetakse 2 kuni 3 tunniks 37 ° C juures. Tahkefaasiliste antikehadega seondumata jäägid eemaldatakse kolm korda 3-minutilise pesemise teel. FSBT. Seejärel valmistatakse süvenditesse 0,05 ml uuritavaid, samuti ilmselt positiivseid ja negatiivseid proove (2 süvendit iga proovi kohta) ja jäetakse 2 tunniks 37 ° C juures, et moodustada antigeen-antikeha kompleksid. Seondumata antigeen ja sellega seotud lisandid eemaldatakse PBS-i kolmekordse pesemisega. Seejärel lisatakse ühes süvendis 0,05 ml 0,5% stafülokokk-diagnostikat, teises (kontroll) 0,05 ml 0,5% stafülokoki suspensioonis, mis oli sensibiliseeritud preimmuunseerumiga (vt 4.4.3). Inkubeerimine toimub 1 kuni 2 tundi temperatuuril 37 ° C, millele järgneb paigutamine 1 kuni 3 tundi temperatuuril 4 ° C või 18 kuni 24 tundi temperatuuril 4 ° C. Aglutinatsioonireaktsiooni tulemust võetakse visuaalselt arvesse: positiivse reaktsiooniga moodustavad aglutineeritud bakterid vihmavari; negatiivse reaktsiooniga - bakterid settivad täielikult ketta kujul.

6.3.5. Kaudse hemaglutinatsiooni meetod

Selle meetodi kohaselt põhineb rotaviiruse antigeeni tuvastamisel erütrotsüütide antikeha diagnostika, mis on rotaviiruse SA-II-ga immuniseeritud valged rotid immunoglobuliini astsiidi vedeliku poolt sensibiliseeritud lammaste erütrotsüüdid.

10% fekaalide suspensiooni kahekordseid lahjendusi paneelkaevudes testitakse erütrotsüütide diagnostikaga. Erütrotsüütide diagnostikumi aglutinatsioon näitab rotaviiruse antigeeni olemasolu proovis. PHA koostamise korra üksikasjalik kirjeldus on esitatud ettevalmistuskomplekti (teadus-tootmise ühing "Rostepidkompleks", Rostov-on-Don) juhendis.

Komplekt Rotatest põhineb vastupidisel passiivsel hemaglutinatsioonil ja see on ette nähtud rotaviiruse avastamiseks väljaheidetes ja vererakkude rotaviiruse vastaste antikehade tuvastamiseks.

6.3.6. Rotaviiruse immunotsütokeemilise avastamise meetod

Meetod põhineb rakkudes sünteesitud viirusantigeeni immunokeemilisel määramisel viiruse sisaldava materjaliga nakatumise tulemusena.

Meetodi eelis ELISA-ga võrreldes on suurem tundlikkus, samuti võime määrata ja kvantifitseerida uuritava proovi nakkavust.

Katse etapid: rohelise ahvi neerude siirdatud rakud kontsentratsiooniga 3 kuni 10 rakku / ml moodustavad lame põhjaga plaatide süvendites 0,2 ml ja inkubeeritakse temperatuuril 37 ° C (24 kuni 48 tundi). Seejärel pestakse rakke Eagle-MEM söötmega. Katsematerjal lahjendatakse Eagle-MEM keskkonnas, aktiveeritakse 1 tund temperatuuril 37 ° C 10 µg / ml trüpsiini juuresolekul ja lisatakse 0,1 ml-s vähemalt 4 süvendisse. Positiivsed kontrollid on süvendid, milles on sisestatud rotaviirust sisaldav materjal. Negatiivsed kontrollid: süvendid, millel on nakatumata rakud ja süvendid, milles materjal viiakse sarnaselt testile, kuid mis ei sisalda rotaviiruseid. Adsorptsioon viiakse läbi 1 tund temperatuuril 37 ° C, seejärel sööde eemaldatakse, rakke pestakse Eagle-MEM söötmega. Kaevudesse lisatakse 0,2 ml Eagle-MEM söödet koos 1 μg / ml trüpsiiniga ja inkubeeritakse 48 tundi temperatuuril 37 ° C.

Rakke pestakse kaks korda soolalahusega ja fikseeritakse külma (-20 °) 85% atsetooniga, inkubeeritakse 2 tundi temperatuuril -20 ° C, seejärel eemaldatakse atsetoon. Paneeli pestakse 3 korda PBS-iga, mis sisaldab 0,05% Tween 20 (PBS-T). Süvenditesse lisatakse 0,1 ml lahjendatud 1: 1000 PBS-T immuunsüsteemi marutaudi anti-rotaviiruse seerumis. Inkubeerige 2 tundi 37 ° C juures. Pärast paneeli pesemist lisatakse süvendisse süvendisse 0,1 ml peroksidaasiga märgistatud IgG-vastast küüliku antikeha (kaubanduslik preparaat) kontsentratsioonis 2 μg / ml peroksidaasi sisaldusega PBS-is koos 1% BSA-ga ja inkubeeritakse 1,5 tundi temperatuuril 37 ° C C.

Paneeli pestakse 2 korda PBS-T ja 1 kord 0,05 M atsetaatpuhvriga, pH 5,0. Kaevudesse lisatakse 0,1 ml värskelt valmistatud peroksidaasi substraadi lahust, mis sisaldas 10 ml atsetaatpuhvrit / 4 mg 3-amino-9-etüülkarbasooli (AEC) 0,5 ml atsetoonis ja 0,01 ml 33% vesinikperoksiidi. (Tähelepanu! Töötamine AEC-ga nõuab ettevaatust). Inkubeerige 30-40 minutit. toatemperatuuril pimedas. Reaktsioon peatatakse, pestes paneeli destilleeritud veega.

Reaktsiooni arvestamine toimub väikese suurendusega valgusmikroskoobi all. Negatiivsed kontrollsüvendid ei tohi sisaldada värvitud rakke. Värvitud rakkude kohalikud klastrid on viirusnakkuse fookused.

6.3.7. Immunofluorestsentsmeetod

Rotaviiruse antigeeni identifitseerimiseks, kasutades immunofluorestsentsi, kasutatakse rakuliini 4647. Rakke kasvatatakse penitsilliinpudelites või -torudes suletud katteplaatidel või slaididel. Nakatunud kultuuri inkubeeritakse temperatuuril 37 ° C 24 kuni 48 tundi, pärast mida eemaldatakse klaasid viaalidest, pestakse 0,15 M soolalahuses, lisades fosfaatpuhvrit pH 7,2 juures, loputatakse destilleeritud veega ja kuivatatakse õhus. Seejärel fikseeritakse preparaadid kahes vahetuses (iga 10 minuti järel) keemiliselt puhas atsetoon, mis on jahutatud temperatuurini 4 ° C.

Preparaate töödeldakse niiskes kambris kaudse meetodiga. Kultuuri rakkudele kantakse üks tilk immuun rotaviiruse küüliku seerumit ja inkubeeritakse 30 minutit. 37 ° C juures pestakse ravimeid kolm korda FSB-s ja eemaldatakse liigne niiskus. Märgpreparaate värvitakse võrdse koguse anti-FITC-konjugaadi ja veise albumiini seguga, mis on märgistatud rodamiiniga, ja inkubeeritakse 30 minutit. temperatuuril 37 ° C Pärast 3 korda pesemist FSB-s kuivatatakse preparaadid õhus. Mittespetsiifilise fluorestsentsi kõrvaldamiseks adsorbeeritakse viirusevastane seerum enne kasutamist normaalse rakukultuuri homogenaadiga ja FITC konjugaati töödeldakse aktiveeritud söega standardmeetodite kohaselt.

Kohustuslike kontrollidena kasutatakse järgmisi kontrolle: infektsioonita kultuuride preparaate, mida töödeldakse sarnasel viisil ja infektsioonkultuuride preparaate, mida töödeldakse sama liigi normaalse ja heteroloogse viirusevastase seerumi esimeses etapis kui rotaviiruse immuunseerumit.

Positiivsete tulemuste korral on rakkude tsütoplasmas täheldatud erilist helerohelist fluorestsentsi.

6.4. Rotaviiruste elektroforeotüüpimise meetod

Meetod põhineb rotaviiruste identifitseerimisel, kasutades viiruse genoomse RNA segmentide polüakrüülamiidgeelelektroforeesi. See meetod võimaldab rotaviiruse tüvede diferentseerumist erinevate isolaatide üksikute RNA segmentide elektroforeetilise liikuvuse erinevuste alusel ja seetõttu kasutatakse seda laialdaselt epidemioloogilistes uuringutes. Meetod ei nõua isolaatide eelkultiveerimist, omab suurt tundlikkust ja absoluutset spetsiifilisust.

See meetod on eriti huvipakkuv epidemioloogidele rotaviirusinfektsiooni puhangute grupi haiguste uurimisel.

Seda saab teha elektroforeesi seadmetega varustatud laborite põhjal.

Analüüsiks piisab 0,2 - 0,5 ml 10-20% fekaalide suspensioonist. Suspensioone töödeldakse freon 113-ga ja inkubeeritakse pronaasiga (0,2 mg / ml, 15 minutit) naatriumdodetsüülsulfaadi (1%) ja naatriumetüleendiamiintetraatsetaadi (0,001 M) juuresolekul. Pärast naatriumatsetaadi (0,3 M) lisamist deproteeritakse RNA fenool: kloroform-isoamüülalkoholi seguga ja sadestatakse 2,5 mahuosaga etanooliga (18 tundi temperatuuril -20 ° C või 2 tundi temperatuuril -70 ° C). Sade kogutakse tsentrifuugimisega, lahustatakse vees ja lisatakse dissotsiatsioonipuhver. Elektroforees viiakse läbi Laemmli meetodil 10% geeli plaatidel. RNA värvimiseks geelis kasutatakse tavaliselt hõbenitraati (0,011 M). Pärast geelil ilmnemise protseduuri on näha 11 RNA riba, mis vastavad rotaviiruse genoomsele segmendile.

6.5. M-klassi immunoglobuliini määramine seerumis

rotaviiruse infektsiooniga patsient tahkefaasilise meetodi abil

koaglutinatsiooni reaktsioonid (TRCA)

Sel juhul kasutatakse modifikatsioonis tahkefaasilise koaglutinatsiooni reaktsiooni (vt 4.3.4) põhimõtet: paneeli süvendite sensibiliseerimiseks kasutage 0,1 ml kaubanduslikku lambaliha monospetsiifilist seerumit inimese IgM vastu lahjendusel 1: 1000. Paneele inkubeeritakse 2-4 tundi 37 ° C juures. Seejärel pestakse süvendeid FSBT-ga, täidetakse 3% želatiinilahusega ja jäetakse 30 minutiks 37 ° C juures. Süvendid pesti FSBT-d ja valmistasid 0,05 ml uuritavat, samuti tahtlikult positiivset ja negatiivset seerumit, lahjendati 1: 100 FSBT-ga (2 auku iga seerumi kohta). Antikeha tiitri määramisel uuritakse testitud proovide topeltlahjendusi (1:10 - 1: 1280). Plaate inkubeeritakse 2 tundi 37 ° C juures ja pärast pesemist viiakse 0,05 ml diagnostikumi ja kontrollreagenti paarikaevudesse. Reaktsiooni võetakse arvesse 1–2 tunni pärast (vt eespool 4.3.4).

Sama põhimõtet, mida on modifitseerinud TRCA, kasutatakse IgG ja IgG antikehade testimiseks rotaviiruse infektsiooni suhtes, samuti laktoglobuliinide ternespiima ja piima analüüsimisel.

M-klassi immunoglobuliini määramise meetodit patsiendi seerumis kasutatakse nii manifesti vormide varajaseks diagnoosimiseks kui ka nende diferentsiaaldiagnoosimiseks koos rotaviirusinfektsiooni asümptomaatiliste vormidega.

7. Epideemiavastased meetmed

Iga rotaviiruse poolt põhjustatud ägeda soolestiku infektsiooni juhtum, eriti esimese eluaasta lapsed, samuti koolieelsetes lastes käivad lapsed vajavad hoolikat epidemioloogilist analüüsi, et selgitada välja leviku allikad, peamised viisid ja tegurid epideemia vastaste meetmete õigeaegseks rakendamiseks. haiguspuhangus.

Meetmed nakkusallika kindlakstegemiseks ja neutraliseerimiseks. Haigust kahtlaste patsientide tuvastamine toimub kõikide tervishoiuasutuste arstide poolt: ambulatoorsete visiitide, koduvisiitide, asutuste meditsiiniliste kontrollide, haiglate jms ajal. Kindlaksmääratud patsiendid on lastegruppidest isoleeritud. Meditsiinilist jälgimist ja patsientide ravi võib läbi viia kodus või haiglas. Lasteasutustesse lastud lapsed, kes on haiglast välja lastud või kes on lõpetanud kodus töötamise negatiivsete laboratoorsete testidega, on lasterühmade juurde lastearsti sertifikaadi alusel lubatud. Lapsed, kellel on WG-d ja kes jätkavad rotaviiruste (või rotaviiruse antigeeni) eritamist koos väljaheidetega ilma nakkuse kliiniliste ilminguteta, võib lasteaedade ja lasteaedade-lasteaedade rühmadesse lubada, pidades silmas pidevat meditsiinilist jälgimist ja korduvat laboratoorset uurimist 2–3 nädalaga haiguse või viiruse isoleerimise algusest.

FG-ga patsientide perekondlike fookuste epidemioloogiline uurimine viiakse läbi alla 2-aastaste laste ja täiskasvanute haiguse tõttu määratavate kontingentide hulgast. Epidemioloog läheb lasteasutusse uuringuga, kui esineb korduvaid mittebakteriaalse gastroenteriidi juhtumeid.

Patsientidega suhtlevate laste meditsiiniline vaatlus viiakse läbi viie päeva jooksul pärast viimase haigestunud isiku isoleerimist.

Patsientidega nii perekonnas kui ka organiseeritud rühmades suhtlevate laste ja täiskasvanute rotaviiruste (antigeeni) laboratoorsed testid viiakse läbi infektoloogi ja epidemioloogi juhiste alusel, kui esineb viiteid (esinemine perekonnas või laste korduvhaiguste rühm OKI-s sarnase kliinikuga), sanitaar- ja hügieenirežiimi tõsine rikkumine, toidukäitlejate ja nendega võrdsustatud isikute olemasolu haiguspuhangus jne). Kohustuslik laboratoorne uuring on haige lapse ema ees esimesel eluaastal. Inimeseid, kellele on leitud väljaheites rotaviirused (antigeen), kontrollib põhjalikult kliiniline nakkushaiguse spetsialist. Haiguse kliiniliste ilmingute puudumisel ei ole lapsed ja meeskonna töötajad isoleeritud.

Toiduettevõtete töötajad, veeteenused jne. re-laboratoorse uurimise ajal ja meditsiinilise järelevalve all töövõtjas. Rotaviiruse (antigeeni) väljaheitega eritatavate korduv laboratoorsed uuringud viiakse läbi vastavalt infektoloogi ja epidemioloogi ettekirjutusele 5-7 päeva intervalliga, kasutades põhjalikku laboriuuringut.

Kui lasteasutustes esineb rühmahaigusi, viiakse karantiinimeetmed läbi viie päeva jooksul pärast viimase patsiendi isoleerimist.

Institutsioonid korraldavad regulaarselt sanitaar- ja haridustööd, mille eesmärk on ennetada rotaviiruse infektsiooni.

Meetmed nakkuse ülekandemehhanismi purustamiseks.

Uuringud on näidanud rotaviirustele kahjulikku toimet +70 ° C juures 15 minuti pärast; ultraviolettkiirgusega kokkupuutel inaktiveeritakse rotaviirused ka 15 minuti pärast.

Seoses resistentsusega laialdaselt kasutatavate desinfektsioonivahendite toimele on rotaviirused lähedased enteroviirustele ja A-hepatiidile. Seetõttu on rotaviiruse infektsiooni keskustes ja haiglates, kus on patsiente, soovitatav läbi viia desinfektsioonimeetmeid vastavalt režiimidele ja kasutades viiruse hepatiidi jaoks soovitatavaid vahendeid. A ja enteroviiruse infektsioonid (NSV Liidu tervishoiuministeeriumi 07.08.1981. Määruse nr 752 määruse nr 4 lisa ja NSV Liidu tervishoiuministeeriumi määrus nr 916, 08/04/83). Erilist tähelepanu tuleb pöörata laste teenindavate isikute käte nõuetekohasele käsitsemisele, nibudele, mänguasjadele, nõudele ja muudele patsientide hooldamiseks mõeldud toodetele.

Soovitatav on regulaarne ultraviolettkiirgus. Ultraviolettkiirgust tehakse tavaliselt kiirgusradiaatoritega - OBN-150 30 kuupmeetril. m toad, OBP-300 60 cu. m toad ja teised. Varjestamata toitekogused on määratud kiirusega 1 - 1,5 W / cu. m ruume ilma inimesteta (et vältida limaskesta kahjustusi), varjestatud - kiirusega 2–2,5 W / cu. m, kiiritamist võib läbi viia inimeste juuresolekul. Desinfitseerimisaeg - 30 - 40 minutit. Õhu kiiritamine peaks toimuma pärast ruumi puhastamist, voodipesu vahetamist ja muud tolmu aerosoolide moodustamisega seotud tööd.

Haigla spetsialiseeritud osakondades peab personal kandma hingamismaske.

Rotaviiruse infektsiooni ennetamiseks mõeldud sanitaar- ja hügieenimeetmete korraldamine toimub vastavalt kehtivatele juhistele ja soovitustele teiste infektsioonide kohta koos patogeeni leviku fekaal-suulise mehhanismiga.

Üks tõhusaid meetmeid rotaviiruse infektsiooni ennetamiseks vastsündinutel on nende rinnaga toitmine.

Rotaviiruse infektsiooni spetsiifilist ennetamist ei toimu.